【顯微課堂】獲得高質(zhì)量的超薄切片

UC Enuity如何幫助您得到厚度一致的超薄切片

在超薄切片中，切片質(zhì)量的一致性對(duì)于準(zhǔn)確進(jìn)行形態(tài)學(xué)分析和精確測(cè)量至關(guān)重要。切片厚度的變化會(huì)扭曲細(xì)胞結(jié)構(gòu)的尺寸和定量數(shù)據(jù)，不利于開(kāi)展對(duì)比研究工作^[1-6]。同時(shí)，它們還會(huì)影響下游實(shí)驗(yàn)的結(jié)果，如免疫標(biāo)記和光譜分析。均勻的切片可確保目標(biāo)分子或感興趣區(qū)域的持續(xù)暴露，從而優(yōu)化標(biāo)記程序的效率和可靠性。

確保精確的切片質(zhì)量，對(duì)于提升與超薄切片相結(jié)合分析技術(shù)的敏感性、特異性和可重復(fù)性至關(guān)重要。在體積電子顯微鏡（Volume EM）領(lǐng)域尤為重要，因?yàn)槠湫枰褂么罅繑?shù)據(jù)來(lái)準(zhǔn)確重建3D分子結(jié)構(gòu)。這種方法所需的數(shù)據(jù)通常是從數(shù)以百計(jì)到數(shù)以千計(jì)的連續(xù)切片中獲取的。

在UC Enuity上，可以通過(guò)調(diào)整進(jìn)給步長(zhǎng)來(lái)改變切片的厚度^[1]。然而，切片邊緣的質(zhì)量在很大程度上受到切片速度的影響 ^[1]。當(dāng)速度過(guò)高時(shí)，會(huì)導(dǎo)致邊緣不銳利，從而降低切片的質(zhì)量 ^[1]。因此，必須在進(jìn)給步長(zhǎng)和切片速度之間保持平衡，以獲得符合所需質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的理想切片 ^[1]。通常，切片速度為1毫米/秒，這是刀具制造商（瑞士Diatome公司）推薦使用的速度。

圖2展示了在切片速度和進(jìn)給之間取得正確平衡后可以獲得的高質(zhì)量切片。

圖3展示了陣列斷層成像實(shí)驗(yàn)連續(xù)切片工作流程的結(jié)果。在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，UC Enuity自動(dòng)制備多個(gè)切片條帶，以便稍后在較大的基底（如載玻片或硅片）上收集。圖3展示了收集前的切片條帶。

基于切片干涉顏色和厚度關(guān)系，所有三個(gè)切片條帶中，總共90張切片的厚度一致。

圖4展示了使用進(jìn)給從30納米增加到180納米，所獲得的嵌入環(huán)氧樹(shù)脂中的組織切片。由于嵌入的組織樣品在200納米及以上厚度參數(shù)下切片效果不佳，因此該系列沒(méi)有擴(kuò)展到180納米以上。該案例展示了UC Enuity的精確度，確保用戶(hù)能夠無(wú)縫地設(shè)置所需的進(jìn)給，從而獲得不同的目標(biāo)切片厚度（見(jiàn)圖1）。

切片質(zhì)量對(duì)于電子顯微鏡樣品制備至關(guān)重要。UC Enuity超薄切片機(jī)憑借70多年的專(zhuān)業(yè)經(jīng)驗(yàn)，是制備鋒利、無(wú)失真且厚度一致的切片，以進(jìn)行電子顯微鏡分析的重要工具。

UC Enuity因其穩(wěn)定的切片質(zhì)量和用戶(hù)友好的操作脫穎而出，無(wú)論是經(jīng)驗(yàn)豐富的研究人員還是新手都能從中受益。通過(guò)提供高質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的可重復(fù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果，UC Enuity減少了切片過(guò)程中經(jīng)常遇到的問(wèn)題，從而便于直接比較實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。這不僅有助于節(jié)省時(shí)間和資源，還避免了重復(fù)樣本制備和圖像采集的工作。